電泳涂裝的技術(shù)現(xiàn)狀及臨床應用診斷參考

        電泳已日益廣泛地應用于分析化學、生物化學、臨床化學、毒劑學、藥理學、免疫學、微生物學、食品化學等各個領域。在直流電場中， 帶電粒子向帶符號相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳（electropho-resis）。1809年俄國物理學家Peнce首先發(fā)現(xiàn)了電泳現(xiàn)象，但直到1937年瑞 典的Tiselius建立了分離蛋白質(zhì)的界面電泳（boundary electrophoresis）之后，電泳技術(shù)才開始應用。本世紀60-70年代，當濾紙、聚丙烯酰 胺凝膠等介質(zhì)相繼引入電泳以來，電泳技術(shù)得以迅速發(fā)展。豐富多彩的電泳形式使其應用十分廣泛。電泳技術(shù)除了用于小分子物質(zhì)的分離分析 外，最主要用于蛋白質(zhì)、核酸、酶，甚至病毒與細胞的研究。由于某些電泳設備簡單，操作方便，具有高分辨率及選擇性特點，已成為醫(yī)學 檢驗中常用的技術(shù)。

        電泳又名 —— 電著 ( 著 ) ，泳漆，電沉積。創(chuàng)始于二十世紀六十年代，由福特汽車公司最先應用于汽車底漆。由于其出色的防腐、防 銹功能，很快在軍工行業(yè)得到廣泛應用。近幾年才應用到日用五金的表面處理。由于其優(yōu)良的素質(zhì)和高度環(huán)保，正在逐步替代傳統(tǒng)油漆噴涂。

區(qū)帶電泳因所用支持體的種類、粒度大小和電泳方式等不同，其臨床應用的價值也各有差異。固體支持介質(zhì)可分為兩類：一類是濾紙、醋 酸纖維素薄膜、硅膠、礬土、纖維素等；另一類是淀粉、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠。由于它們具微細的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故除能產(chǎn)生電泳作用外 ，還有分子篩效應，小分子會比大分子跑得快而使分辨率提高。它的最大優(yōu)點是幾乎不吸附蛋白質(zhì)，因此電泳無拖尾的現(xiàn)象。低濃度的瓊脂糖 電泳相當于自由界面電泳，蛋白質(zhì)在電場中可自由穿透，陰力小，分離清晰，透明度高，能透過200～7000nm波長的著色區(qū)帶的檢測敏感性，為 此第一類支持介質(zhì)現(xiàn)已被第二類支持介質(zhì)所替代。

        穩(wěn)太電泳或稱置換電泳的特點是分子顆粒的電泳遷移在一定時間后達到穩(wěn)態(tài)，如等電聚焦和等速電泳。

　　區(qū)帶電泳是臨床檢驗領域中應用最廣泛的技術(shù)，有重要臨床意義，尤其是其他新技術(shù)，更擴大了其應用范圍，提高了檢測技術(shù)，現(xiàn)對該技 術(shù)的現(xiàn)狀與發(fā)展作一評述。

        一、正確解釋電泳結(jié)果，有助于臨床疾病判斷的參考

　　新鮮血清經(jīng)電泳后可精確地描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌，一般常見的是白蛋白降低、某個球蛋白區(qū)域升高，提示不同的臨床意義。如急性炎 癥時，可見a1，a2區(qū)百分率升高；腎病綜合征、慢性腎小球腎炎時呈現(xiàn)白蛋白下降，a2球蛋白升高，β球蛋白也升高；缺鐵性貧血時可由于轉(zhuǎn) 鐵蛋白的升高而呈現(xiàn)β區(qū)帶增高，而慢性肝病或肝硬變呈現(xiàn)白蛋白顯著降低，r球蛋白升高2-3倍，示免疫球蛋白多克隆增高，甚至可見β-r融 合的橋連現(xiàn)象，還可在r區(qū)呈現(xiàn)細而密的寡克隆區(qū)帶；對單一克隆漿細胞異常增殖所產(chǎn)生的無抗體活性均一的免疫球蛋白稱M蛋白的檢測，血清 蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法?？稍陔娪緟^(qū)帶的a2-r區(qū)呈現(xiàn)致密而深染，高度集中的蛋白克隆增生區(qū)帶，稱其為m蛋白區(qū)帶，掃描后形成高 而狹窄的單株峰，若些峰在r區(qū)其峰高與峰底寬之比>2：1，而由于正常免疫球蛋白合成限制造成背景染色淺。由M蛋白所導致的一組疾病如：多 發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病、游離輕鏈病、半分子病、良性單株丙球血癥和雙M蛋白血癥等，目前這類疾病已不屬罕見。血清蛋白電泳 對這類疾病的早期診斷，療效觀察和預后判斷均有十分重要的意義。

        二、電泳設備的技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴大了其臨床應用的范圍

        讓電流來加速抗原與抗體的擴散并規(guī)定其運行方向、從而加快了沉淀反應速度。免疫電泳技術(shù)的種子類很多，如：對流免疫電泳（CIEP） 、火箭免疫電泳（RIE）、電免疫擴散（EID）。在種免疫電泳方法牟基礎上，又不斷地派生出一些新的技術(shù)，如：免疫電泳（IEP）技術(shù)，1969 年Alper與Johnson推薦免疫固定電泳（IFE）是一種包括瓊脂糖凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個過程的操作，是免疫沉淀反應的一種混合技術(shù)，檢 測標本可以是血清、尿、腦脊液或其他體液。1976年血清免疫固定電泳（IF）技術(shù)再次被推薦，用于M蛋白的分型。血清蛋白質(zhì)在瓊脂糖凝介質(zhì) 上經(jīng)電泳分離后，應用固定劑和各型免疫球蛋白及輕鏈抗血清，加于凝膠表面的泳道上，經(jīng)孵育讓固定劑和抗血清的在凝膠內(nèi)滲透并擴散后， 若有對應的原存在，則在適當位置形成抗原抗體復合物。經(jīng)染色后蛋白質(zhì)電泳參考泳道和抗原抗體沉淀區(qū)帶被氨基黑著色，根據(jù)電泳移動距離 分離出單克隆組分，可對各類免疫球蛋白及其輕鏈進行分型。該技術(shù)的最大優(yōu)勢是敏感性達50-150mg/dl，操作周期短，僅需數(shù)小時，分辨率高 ，結(jié)果易于分析?，F(xiàn)最常用于M蛋白的分型與鑒定，已列入臨床實驗室的常規(guī)檢測工作。

        三、電泳技術(shù)進行同工酶譜分析，提高診斷率

        1、血清乳酸脫氫酶同工酶（iso-LDH）：測定LDH同工酶有電泳法、離子交換柱層析法、免疫法、抑制劑法和酶切法，但迄今用得取多的仍 是瓊脂糖凝膠電泳法。經(jīng)電泳分離后要分離出五種同工酶區(qū)帶，急性必肌梗塞發(fā)病后平均6hLDH1即開始升高，LDH1/LDH2≥1為心肌損傷的陽性 決定性水平，肝癌時可見LDH5明顯升高，各區(qū)帶含量的確定，將經(jīng)電泳分離后的同工酶譜采用掃描予以定量，其精確度明顯高于用肉眼判斷。2、血清肌酸激酶同工酶（ISO-CK）；電子秤測定CK和CH-MB仍是目前用于證實急性心肌梗塞的 道選指標。近年來國內(nèi)一些單位用免疫抑制法測CK=MB，其原理為抗M亞單位的酶活性，因為正常血清中幾乎無CK=BB，故將此值乘以2可以認為 大致代表CK-MB的活性。此法簡單迅速，缺點是特異性差，如患者血清中存在CK-BB或者異常CK時，都將出現(xiàn)假性增高。不少作者報道異常CD-同 工酶，一條稱巨CK（Maxro-CK），它是CK-BB與免疫球蛋白的復合物，有IgG亦有IgA，在正常血清中Marco-CK僅占0.8%-1.6%.另一條稱線粒體CK （CK-MT），CK-MT是結(jié)合在肌肉、腦、肝內(nèi)的線粒體表面，可能是線粒體膜的碎片，在正常血清中CK-MT是不出現(xiàn)的，在心梗時亦不出現(xiàn)，只有 當組織極度損傷，由于線粒體和細胞壁極度破壞，方可在血清中檢出。由于Macro-CK和不典型的CK-MT均不能被M抗體所抑制，故當它們出現(xiàn)時 ，會導致CK-MB高于CK總活力的假性升高。使用電泳方法分離CK-MB，是根據(jù)CK-同工酶分子結(jié)構(gòu)不同，在電泳緩沖液中，所帶電荷各異，可以從 陰極到陽極將CK不同組份予以分離，其分別為CK-MM，CK-MB和CK-BB.電泳特點是當出現(xiàn)異常2同工酶如巨CKⅠ、巨CKⅡ等，從電泳圖譜上很容易 發(fā)現(xiàn)，由掃描儀對各條酶進行掃描，報告各條區(qū)帶所占百分比，結(jié)合總酶活力，求得區(qū)帶的酶省略定值結(jié)果。Macro-CK在CK-MM和CK-MB中間， 而CK-MT位置靠近陰極端，在CK-MM后面。這樣不會將CK-BB和各種異常同工酶誤認為是CK-MB而誤診，也可解決CK-MB假性增高的錯誤原因所在。 為此，CK同工酶電泳是項非常實用的檢驗技術(shù)，具有十分重要的臨床意義3、CK亞型同工酶：此外，CK-MB和CK-MM亞型測定常采用瓊脂糖凝膠等 電聚焦電泳或高壓電泳，由于操作比一般電泳麻煩，故常規(guī)常測定尚無法普及。目前引進的先進電泳設備自動電泳儀，有試劑盒提供，可作CK亞型分析，參 考值：CK-MM1（57.7±4.7）%；CK-MM2為（26.5±5.3）；CK-MM3為（15.8±2.5）%；CK-MM3/CK-MM1比值為0.28±0.05（范圍0.15-0.39），陽 性決定性水平>0.5.AMI第一天血中以MM3為主，但第二天以后則以MM1為主。采用電泳法分離CKMB，CKMB1和CKMB2在正常人血中CK-MB2極微，一 般比值近似是而非，在急性心肌梗塞后4-6hCKMB2亞型即在血循環(huán)中可被檢測到，故MB2/MB1的比例明顯升高，并早于總CK-MB片段的增高。當心 肌梗塞緩解后此比便也逐漸下降。也可用于溶栓治療后的病情觀察。